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                                    三七葉皂苷上層析柱的操作步驟，柱層析怎么顯色在什么時(shí)候加入顯色劑 
        
    
    
    

    

    

    
    
        
    
            
    三七葉皂苷上層析柱的操作步驟，柱層析怎么顯色在什么時(shí)候加入顯色劑 
    

            
    
                發(fā)布時(shí)間：2023-06-13 03:50
                編輯：網(wǎng)絡(luò ) 
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                    本文目錄一覽柱層析怎么顯色在什么時(shí)候加入顯色劑2，柱層析的基本操作過(guò)程3，植物多酚柱層析純化方法中關(guān)鍵操作是什么4，皂苷的檢測方法5，吸附柱層析法吸附柱怎么做6，做柱層析時(shí)裝柱子的過(guò)程是怎樣的7，怎樣裝層析柱才不會(huì )有氣泡8，請問(wèn)一下親和……
                
    
            
    

            
    



                
    本文目錄一覽
    1，柱層析怎么顯色在什么時(shí)候加入顯色劑
    

    高錳酸鉀、紫外、DNP、濃硫酸等是常用的方法
    三七葉皂苷上層析柱的操作步驟
    

    2，柱層析的基本操作過(guò)程
    

    






柱層析的基本操作過(guò)程：主要包括常壓分離、減壓分離和加壓分離 3種模式。常壓分離是最簡(jiǎn)單的分離模式方便、簡(jiǎn)單 ,但是洗脫時(shí)間長(cháng)。減壓分離盡管能節省填料的使用量 ，但是由于大量的空氣通過(guò)填料會(huì )使溶劑揮發(fā) ，并且有時(shí)在柱子外面會(huì )有水汽凝結 ，以及有些易分解的化合物也難以得到 ，而且還必須同時(shí)使用水泵或真空泵抽氣。加壓分離可以加快淋洗劑的流動(dòng)速度 ，縮短樣品的洗脫時(shí)間，是一種比較好的方法 ，與常壓柱類(lèi)似 ，只不過(guò)外加壓力使淋洗液更快洗脫。壓力的提供可以是壓縮空氣 ，雙連球或者小氣泵等。柱層析技術(shù)也稱(chēng)柱色譜技術(shù)。一根柱子里先填充不溶性基質(zhì)形成固定相，將混合樣品加到柱子上后用特別的溶劑洗脫，溶劑組成流動(dòng)相。在樣品從柱子上洗脫下來(lái)的過(guò)程中，根據混合物中各組分在固定向和流動(dòng)相中的分配系數不同經(jīng)過(guò)多次反復分配，將不同組分逐一分離。根據填充基質(zhì)和樣品分配交換原理不同，離子交換層析，凝膠過(guò)濾層析和親和層析是三種分離混合物的經(jīng)典層析技術(shù)。


    三七葉皂苷上層析柱的操作步驟
    

    3，植物多酚柱層析純化方法中關(guān)鍵操作是什么
    

    濕法裝柱。液面高度要是低于液床高度，或是過(guò)松過(guò)緊，有氣泡，有斷節，都會(huì )對實(shí)驗后續產(chǎn)生很大的影響。其實(shí)哪一步操作沒(méi)做好后邊都不能成功了，這步相對而言重要。
    支持一下感覺(jué)挺不錯的
    三七葉皂苷上層析柱的操作步驟
    

    4，皂苷的檢測方法
    

    






本方法適用于功能性食品中總皂苷的測定　　本方法人參皂苷Re的低檢出量為2μg/mL　　一、方法提要　　樣品中總皂苷經(jīng)提取、PT—大孔吸附樹(shù)脂柱預分離后，在酸性條件下，香草醛與人參皂苷生成有色化合物，以人參皂苷Re為對照品，于560nm處比色測定?！　《?、儀器　　1.722分光光度計?！　?.PT—大孔吸附樹(shù)脂柱(河北省津楊濾材廠(chǎng))?！　?.超聲波振蕩器?！　∪?、試劑　　1.甲醇(分析純)　　2.乙醇(分析純)　　3.人參皂苷Re標準品(中國藥品生物制品檢定所)　　4.5%香草醛溶液：稱(chēng)取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至l00mL　　5.高氯酸(分析純)　　6.冰乙酸(分析純)　　7.人參皂苷Re標準溶液：稱(chēng)取人參皂苷Re標準品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，即每1mL含人參皂苷Re2.0mg　　8.重蒸水　　四、測定步驟　　1.樣品處理：　　(1)固體樣品　　稱(chēng)取1.0g左右樣品于100mL燒杯中，加入20～40mL 85%乙醇，超聲波振蕩30min，再定容至50mL，搖勻，放置，吸取上清液1.0mL揮干后以水溶解殘渣，進(jìn)行柱分離　　(2)液體樣品　　含乙醇的酒類(lèi)樣品：準確吸取1.0mL樣品放于蒸發(fā)皿中，蒸干，用水溶解殘渣，用此液進(jìn)行柱層析；非乙醇類(lèi)液體樣品：準確吸取1.0mL樣品(如濃度高或顏色深，需稀釋一定體積后再取1.0mL)直接進(jìn)行柱分離　　2.柱層析　　以PT—大孔吸附樹(shù)脂柱進(jìn)行層析分離，準確吸取上述已處理好的樣品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性雜質(zhì)，棄去洗脫液，再用20mL85%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，以此作顯色用


    

    5，吸附柱層析法吸附柱怎么做
    

    將需層析的物料和層析填料按照比例拌勻上柱，上柱時(shí)填料一定要裝實(shí)，不能有空氣氣泡或其他間隙。
    將固定相用溶劑浸泡后灌入柱內，柱下端有一個(gè)閥門(mén)，將溶劑放至比固定相表面高1-2公分即可。
    

    6，做柱層析時(shí)裝柱子的過(guò)程是怎樣的
    

    把柱子壓干，或者如果你不著(zhù)急用的話(huà)可以將柱子先放一段時(shí)間，等硅膠干了以后將硅膠倒出來(lái)就好了?？梢杂盟聪?，也可以不洗，除非里面粘了什么東西。下次再用的時(shí)候用乙醇洗洗然后吹干就好了。層析住還是蠻好處理的。
    裝柱方法分為濕法和干法，一般來(lái)說(shuō)，濕法裝柱的效果優(yōu)于干法裝柱。濕法裝柱：先將柱層析的填料活化處理后浸潤在適宜的有機溶劑中，使之處于有機環(huán)境。裝柱時(shí)在層析柱自下而上依次填入硅烷花玻璃棉→石英砂→已處理好的層析填料，一邊裝柱一邊用洗耳球輕輕敲打，使填料緊實(shí)，然后打開(kāi)旋塞放掉多余的有機溶劑即可進(jìn)行樣品分析。干法裝柱：現在層析柱內填入硅烷花玻璃棉，然后用不同極性的有機溶劑對層析柱的內壁進(jìn)行充分潤洗，待層析柱晾干，依次填入石英砂及各種層析填料，同樣，一邊裝柱一邊用洗耳球輕輕敲打，使填料緊實(shí)，然后加入一定量的有機溶劑淋洗填好的柱子，一般這個(gè)體積為柱子死體積的2倍。然后打開(kāi)旋塞使淋洗液流出，即可進(jìn)行樣品分析。  填料緊實(shí)是保證層析柱柱效的關(guān)鍵，一定要注意。層析柱最下層的棉花，我們一般是用硅烷花玻璃棉的，在馬弗爐中活化即可用。如果用脫脂棉，需要用二氯甲烷抽提3遍以去除雜質(zhì)，以防干擾實(shí)驗。
    加填料的時(shí)候要輕輕敲打柱子 這樣柱子能裝的比較實(shí) 柱子裝不實(shí)的話(huà) 可能就白過(guò)了
    

    7，怎樣裝層析柱才不會(huì )有氣泡
    

    要是已經(jīng)上樣了，建議還是沖柱，要是重裝柱子，浪費人力物力！
    我干柱和濕柱都裝過(guò)的，沒(méi)有你說(shuō)的那么多氣泡的。教教你吧。層析柱有很多種的。不知道你的層析柱是多大的啊，還有時(shí)硅膠層析柱嗎？其實(shí)，不管是干柱和濕柱，不都要加層析液?jiǎn)?？你不能要求它一開(kāi)始就沒(méi)有氣泡的。要用洗脫劑不停的洗脫，怎么說(shuō)呢，就是用你配置好的試劑一邊一邊對柱子進(jìn)行洗脫（這是關(guān)鍵，也是裝柱的必要步驟地），這樣不但可以消除氣泡，還可以使硅膠充分沉降，讓層析效果更好。等柱子沒(méi)有氣泡后在上樣用洗脫液進(jìn)行層析。還有，提醒一下，不知道你的柱子有多大，如果大的話(huà)，比如我用過(guò)的那種高2米，直徑大約10厘米的柱子的話(huà)，你就不能心急了，光我剛說(shuō)的那第一步就要1個(gè)多星期才能好，才能上樣，層析。但如果柱子不大的話(huà)，比如半米來(lái)長(cháng)的小柱子的話(huà)，那就好多了，一般沉降個(gè)大半天就能上樣了。具體情況自己看了。不知道能幫你不，如果還有什么關(guān)于層析柱的問(wèn)題你也可以直接問(wèn)我啊，我會(huì )盡量幫你的。
    干法裝柱確實(shí)容易產(chǎn)生氣泡，裝完柱后用吸耳球吸耳球敲打柱壁會(huì )趕走氣泡，但要有耐心，要將硅膠完全壓實(shí)才會(huì )沒(méi)有氣泡。最好的辦法是將柱子底部與真空泵相連，打開(kāi)真空泵將氣體抽出，這樣裝的柱子氣泡很少。濕法裝柱要注意在裝柱之前要趕走氣泡，可以用玻棒攪拌至無(wú)氣泡；也可以用超聲波趕走氣泡，一般將硅膠或其他載體裝入燒杯中，加入平衡液，放入超聲波清洗儀中超聲10-15分鐘，然后裝柱。裝柱時(shí)最好一氣呵成。當然平衡柱子也很重要。
    

    8，請問(wèn)一下親和層析的操作要點(diǎn)是什么啊
    

    （一）原理    親和層析是一種吸附層析，抗原（或抗體）和相應的抗體（或抗原）發(fā)生特異性結合，而這種結合在一定的條件下又是可逆的。所以將抗原（或抗體）固相化后，就可以使存在液相中的相應抗體（或抗原）選擇性地結合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質(zhì)分開(kāi)，達到分離提純的目的。    此法具有高效、快速、簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。   （二）載體的基本要求和選擇理想的載體應具有下列基本條件：①不溶于水，但高度親水；②惰性物質(zhì)，非特異性吸附少；③具有相當量的化學(xué)基團可供活化；④理化性質(zhì)穩定；⑤機械性能好，具有一定的顆粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好為多孔的網(wǎng)狀結構，使大分子能自由通過(guò)；⑦能抵抗微生物和醇的作用。    可以做為固相載體的有皂土、玻璃微球、石英微球、羥磷酸鈣、氧化鋁、聚丙烯酰胺凝膠、淀粉凝膠、葡聚糖凝膠、纖維素和瓊脂糖。在這些載體中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特異性吸附。纖維素的非特異性吸附強。聚丙稀酰胺凝膠是目前的首選優(yōu)良載體。    瓊脂糖凝膠的優(yōu)點(diǎn)是親水性強，理化性質(zhì)穩定，不受細菌和酶的作用，具有疏松的網(wǎng)狀結構，在緩沖液離子濃度大于0.05Mol/L時(shí)，對蛋白質(zhì)幾乎沒(méi)有非特異性吸附。瓊脂糖凝膠極易被溴化氫活化，活化后性質(zhì)穩定，能經(jīng)受層析的各種條件，如0.1Mol/L NaOH或1Mol/L HCl處理2h~3h及蛋白質(zhì)變性劑7Mol/L尿素或6Mol/L鹽酸胍處理，不引起性質(zhì)改變，故易于再生和反復使用。    瓊脂糖凝膠微球的商品名為Sepharose，含糖濃度為2%、4%、6%時(shí)分別稱(chēng)為2B、4B、6B。因為Sepharose 4B的結構比6B疏松，而吸附容量比2B大，所以4B應用最廣。    （三）試劑與配制    1．Sepharose 4B    2．CNBr（劇毒）    3．抗原或抗體    4．1Mol/L NaHCO3  取NaHCO3 84.01g加水至1 000ml。    5．0.1Mol/L NaHCO3    6．2Mol/L NaOH    7．0.01Mol/L pH7.4 PBS       0.2Mol/L Na2HPO4   38.0ml       0.2Mol/L Na2HPO4  162.0ml                NaCl      32.76g    加水至4 000ml。    8．0.1Mol/L pH 2.8 甘氨酸即氨基乙酸—HCl緩沖液  甘氨酸15.01g加水至1 000ml，取此液，加0.2Mol/L HCl 84ml加水166ml共500ml。    9．7Mol/L尿素    10．0.2Mol/L NaHCO3,（含0.1Mol/L NaCI）       1Mol/L NaHCO3  100.00ml              NaCl     2.93g       加水至500.00ml。    （四）實(shí)驗方法    1．瓊脂糖活化    ⑴ 取20ml Sepharose 4B放在布氏漏斗中抽干，加少量的0.1Mol/L pH 9.0 NaHCO3液洗滌，立即轉入100ml燒杯中，冰浴置于磁力攪拌器上。    ⑵ 在通風(fēng)櫥內稱(chēng)取2g溴化氰，加水20ml溶解，然后倒入瓊脂糖中，小心滴加2Mol/L NaOH,使pH保持在11左右，反應10min。在1min~2min迅速調整pH為8.0～11.0維持10min。    ⑶ 將活化的瓊脂糖迅速倒入布氏漏斗中，以冰水抽洗成中性，再迅速以250ml冷的0.1Mol/L pH 9.0 NaHCO3抽洗。2．偶聯(lián)蛋白  20ml 4B液體相當于一半的固相載體。⑴ 事先將需偶聯(lián)的抗原（或抗體）蛋白200mg置于0.1Mol/L pH 9.0 NaHCO3液中透析數小時(shí)(一般偶聯(lián)量為10~30mg/g載體)。⑵ 將活化的瓊脂糖迅速倒入蛋白液中（在1.5min內，從抽洗到偶聯(lián)），4℃緩慢攪拌過(guò)夜，使蛋白與活化的瓊脂結合。3．裝柱    ⑴ 選柱：不宜過(guò)大，一般以1.5×15cm的層析柱可裝偶聯(lián)蛋白的瓊脂糖約30ml。    ⑵ 裝柱：將已與蛋白偶聯(lián)的瓊脂糖裝入層析柱內，擰緊下口夾，讓其下沉，數分鐘后松開(kāi)下口夾，使溶液約以1ml/min的速度流出。    ⑶ 洗柱：以0.2Mol/L pH 9.0 NaHCO3（含0.1Mol/L NaCl）洗滌至洗出液的OD280＜0.02為止。收集全部的洗脫液，測得的OD280值×洗脫液的總ml數即為未偶聯(lián)蛋白的含量，由此可計算偶聯(lián)率。4．吸附與解吸附    ⑴按床體積1/10加樣，濃度為1％～2%，緩慢加入待純化的抗體（或抗原），用0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脫，流速為1ml/min，至洗出液OD280＜0.02為止。    ⑵加0.1Mol/L pH2.4甘氨酸－HCl緩沖液，流速1ml/min，收集解吸附下來(lái)的成分，立即以1Mol/L NaHCO3中和，以免蛋白變性。5．以?xún)杀扼w積的7Mol/L尿素洗滌，再用0.01Mol/L pH 7.4PB液或生理鹽水洗滌，平衡后，可繼續使用。保存可加入0.02%Na N3于4℃保存。防止冷凍和干裂。6．結果判定    ⑴ 對解吸附下來(lái)的蛋白以圓盤(pán)電泳或雙相瓊脂糖電泳進(jìn)行純度鑒定。⑵ 將純度好的各管洗脫液合并，以生理鹽水透析，然后濃縮或凍干保存。
    

    9，層析法的主要操作
    

    HPLC培訓教程 我國藥典收載高效液相色譜法項目和數量比較表： 方法 項目 數量 1985年版 1990年版 1995年版 2000年版 HPLC法 鑒別 9 34 150 檢查 12 40 160 含量測定 7 60 117 387 鑒于HPLC應用在藥品分析中越來(lái)越多，因此每一個(gè)藥品分析人員應該掌握并應用HPLC。 I．概論 一、液相色譜理論發(fā)展簡(jiǎn)況 色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobile phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱(chēng)為色層法、層析法。 色譜法最早是由俄國植物學(xué)家茨維特（Tswett）在1906年研究用碳酸鈣分離植物色素時(shí)發(fā)現的，色譜法(Chromatography)因之得名。后來(lái)在此基礎上發(fā)展出紙色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法。 液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱(chēng)為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(cháng)（常有幾個(gè)小時(shí)）。高效液相色譜法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在經(jīng)典液相色譜法的基礎上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。它與經(jīng)典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì )引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱(chēng)高壓液相色譜法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。又因分析速度快而稱(chēng)為高速液相色譜法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。也稱(chēng)現代液相色譜。 二、HPLC的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn) HPLC有以下特點(diǎn)： 高壓—壓力可達150~300Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。 高速—流速為0.1~10.0 ml/min。 高效—可達5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達100種。 高靈敏度—紫外檢測器靈敏度可達0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。 HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)： 速度快—通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內即可完成。 分辨率高—可選擇固定相和流動(dòng)相以達到最佳分離效果。 靈敏度高—紫外檢測器可達0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達0.1pg。 柱子可反復使用—用一根色譜柱可分離不同的化合物。 樣品量少，容易回收—樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。 三、色譜法分類(lèi) 按兩相的物理狀態(tài)可分為：氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物。GC根據固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC)，其中以GLC應用最廣。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩定性差的物質(zhì)。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC)，它以超臨界流體（界于氣體和液體之間的一種物相）為流動(dòng)相（常用CO2），因其擴散系數大，能很快達到平衡，故分析時(shí)間短，特別適用于手性化合物的拆分。 按原理分為吸附色譜法(AC)、分配色譜法(DC)、離子交換色譜法(IEC)、排阻色譜法(EC，又稱(chēng)分子篩、凝膠過(guò)濾(GFC)、凝膠滲透色譜法(GPC）和親和色譜法。(此外還有電泳。) 按操作形式可分為紙色譜法(PC)、薄層色譜法(TLC)、柱色譜法。 四、色譜分離原理 高效液相色譜法按分離機制的不同分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法。 1．液固色譜法 使用固體吸附劑，被分離組分在色譜柱上分離原理是根據固定相對組分吸附力大小不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)吸附－解吸附的平衡過(guò)程。常用的吸附劑為硅膠或氧化鋁，粒度5~10μm。適用于分離分子量200~1000的組分，大多數用于非離子型化合物，離子型化合物易產(chǎn)生拖尾。常用于分離同分異構體。 2．液液色譜法 使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于擔體表面，或化學(xué)鍵合于擔體表面而形成的固定相，分離原理是根據被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離。分離過(guò)程是一個(gè)分配平衡過(guò)程。 涂布式固定相應具有良好的惰性；流動(dòng)相必須預先用固定相飽和，以減少固定相從擔體表面流失；溫度的變化和不同批號流動(dòng)相的區別常引起柱子的變化；另外在流動(dòng)相中存在的固定相也使樣品的分離和收集復雜化。由于涂布式固定相很難避免固定液流失，現在已很少采用?，F在多采用的是化學(xué)鍵合固定相，如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱。 液液色譜法按固定相和流動(dòng)相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。 正相色譜法 采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相)；流動(dòng)相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類(lèi)如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類(lèi)、胺類(lèi)、羰基類(lèi)及氨基酸類(lèi)等）。 反相色譜法 一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動(dòng)相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛，據統計，它占整個(gè)HPLC應用的80%左右。 隨著(zhù)柱填料的快速發(fā)展，反相色譜法的應用范圍逐漸擴大，現已應用于某些無(wú)機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過(guò)程的解離，常用緩沖液控制流動(dòng)相的pH值。但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5（2~8），太高的pH值會(huì )使硅膠溶解，太低的pH值會(huì )使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH 1.5~10范圍操作。 正相色譜法與反相色譜法比較表 正相色譜法 反相色譜法 固定相極性 高～中 中～低 流動(dòng)相極性 低～中 中～高 組分洗脫次序 極性小先洗出 極性大先洗出 從上表可看出，當極性為中等時(shí)正相色譜法與反相色譜法沒(méi)有明顯的界線(xiàn)（如氨基鍵合固定相）。 3．離子交換色譜法 固定相是離子交換樹(shù)脂，常用苯乙烯與二乙烯交聯(lián)形成的聚合物骨架，在表面未端芳環(huán)上接上羧基、磺酸基（稱(chēng)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂）或季氨基（陰離子交換樹(shù)脂）。被分離組分在色譜柱上分離原理是樹(shù)脂上可電離離子與流動(dòng)相中具有相同電荷的離子及被測組分的離子進(jìn)行可逆交換，根據各離子與離子交換基團具有不同的電荷吸引力而分離。 緩沖液常用作離子交換色譜的流動(dòng)相。被分離組分在離子交換柱中的保留時(shí)間除跟組分離子與樹(shù)脂上的離子交換基團作用強弱有關(guān)外，它還受流動(dòng)相的pH值和離子強度影響。pH值可改變化合物的解離程度，進(jìn)而影響其與固定相的作用。流動(dòng)相的鹽濃度大，則離子強度高，不利于樣品的解離，導致樣品較快流出。 離子交換色譜法主要用于分析有機酸、氨基酸、多肽及核酸。 4．離子對色譜法 又稱(chēng)偶離子色譜法，是液液色譜法的分支。它是根據被測組分離子與離子對試劑離子形成中性的離子對化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強度大的酸堿物質(zhì)。 分析堿性物質(zhì)常用的離子對試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強的離子對。 分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。 離子對色譜法常用ODS柱（即C18），流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水，水中加入3~10 mmol/L的離子對試劑，在一定的pH值范圍內進(jìn)行分離。被測組分保時(shí)間與離子對性質(zhì)、濃度、流動(dòng)相組成及其pH值、離子強度有關(guān)。 5．排阻色譜法 固定相是有一定孔徑的多孔性填料，流動(dòng)相是可以溶解樣品的溶劑。小分子量的化合物可以進(jìn)入孔中，滯留時(shí)間長(cháng)；大分子量的化合物不能進(jìn)入孔中，直接隨流動(dòng)相流出。它利用分子篩對分子量大小不同的各組分排阻能力的差異而完成分離。常用于分離高分子化合物，如組織提取物、多肽、蛋白質(zhì)、核酸等。 被分離組分在柱中的洗脫原理
    




            
    

            
            
            
            
            
            
            
            
            
            
        
    
        
        
    
            
    
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