三七薄層鑒別，復(fù)方血栓通膠囊
發(fā)布時(shí)間：2022-07-07 09:20
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1，復(fù)方血栓通膠囊
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2，怎樣識(shí)別三七的真假和新鮮
一、顏色 三七粉顏色為淡黃色或淡綠色，隨著粉質(zhì)的細(xì)度不同顏色顏色也會(huì)有變化，粉質(zhì)越細(xì)三七粉的顏色越淡，如普通細(xì)度的三七粉顏色較深，為土黃色；超細(xì)粉的顏色較淺接近白色。現(xiàn)在市面上不少不良商家在三七粉中摻假，通常采用加入面粉、水泥等顏色相近的物品冒充。二、味道 三七粉味甘微苦，用手指蘸三七粉放于舌尖，抿嘴品嘗，苦后回甜，三七粉的苦味在口里停留的時(shí)間不長(zhǎng)，總結(jié)為五個(gè)字：“到口不到喉”，不會(huì)有辛辣等其他味道； 三、沖水后鑒別 真正的優(yōu)質(zhì)三七粉沖水放置幾分鐘后，分為上下兩層，上層清澈，顏色黃中稍見綠，水面無(wú)漂浮物，下層約見一些沉淀物，為淡黃色，無(wú)雜質(zhì)。淺飲一口，味道醇正、苦后回甜。 四、三七是類圓形或者圓柱形的。類圓就是大概看著是圓形，但實(shí)際上不是完整的圓形。因?yàn)樵谒谋砻妫?jīng)常有一些瘤狀突起，還有皺紋和支根斷裂后的痕跡。經(jīng)過簡(jiǎn)單加工后的表面，瘤狀突起被打磨掉，顯得比較光滑。顏色主要是灰褐色或土黃色。假的三七主要是一些姜科植物。經(jīng)過人工雕刻，當(dāng)然雕刻成接近三七的形狀。但外表會(huì)有明顯的環(huán)形節(jié)，還有人工雕刻的一些痕跡，就是很不自然的。顏色主要是灰黃色。五、三七橫切面顏色以墨綠色和灰綠色為好，菊花心最佳。現(xiàn)在購(gòu)買三七的產(chǎn)品非常方便，電商平臺(tái)就能購(gòu)買。值得選擇注意：1看是否有不良添加劑；2看平臺(tái)，資質(zhì)是否齊全、是否有追溯機(jī)制，售后有保障。
3，滇藥女金丹丸成分配方
據(jù)說是由~黃芪、熟地黃、川芎、香附、熟三七，白術(shù)、杜仲、砂仁、益母草、牛膝、白芍、黨參、續(xù)斷、阿膠、酸棗仁等三十六味中藥材組成的~~但是這類藥物基本上不靠譜！女金丹丸由黃芪、熟地黃、川芎、香附、熟三七，白術(shù)、杜仲、砂仁、益母草、牛膝、白芍、黨參、續(xù)斷、阿膠、酸棗仁等三十六味中藥材組成，在婦科疾患方面，尤其是在調(diào)經(jīng)止痛、治療不孕癥等方面，功效卓著；對(duì)氣血兩虧引起的月經(jīng)不調(diào)，崩漏帶下，腎虛宮冷，腰腿酸軟，宮冷不孕，小腹疼痛有很好的效果。為有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，本試驗(yàn)用薄層色譜法對(duì)方中白芍、香附進(jìn)行定性鑒別。
4，三七粉的好壞怎么辨別三七真?zhèn)蔚蔫b別
1、看物理性狀。三七粉末灰黃色。淀粉粒甚多，單粒圓形、半圓形或圓多角形，直徑4~30微米；復(fù)粒由2~10余分粒組成。樹脂道碎片含黃色分泌物。梯紋、網(wǎng)紋及螺紋導(dǎo)管直徑15~55微米。草酸鈣簇晶少見，直徑50~80微米。2、化學(xué)鑒別：取本品粉末2克，加甲醇15毫升，溫浸30分鐘（或冷浸振搖1小時(shí)），濾過。取濾液1毫升，蒸干，加醋酐1毫升，與硫酸1~2滴，顯黃色，漸變?yōu)榧t色、紫色、青色、污綠色。另取濾液數(shù)滴，點(diǎn)于濾約上，干后，置紫外光燈下觀察，顯淡藍(lán)色熒光，滴加硼酸飽和的丙酮溶液與10%枸椽酸溶液各1滴，干后，置紫外光燈下觀察，有強(qiáng)烈的黃綠色熒光。3、泡沫鑒別：取少量樣品，置于方便得到的容器中，加水10倍攪拌，很快出現(xiàn)泡沫者為真品。4、簡(jiǎn)單方法鑒別：就是看三七粉是用多少頭三七所打的粉，一般來說越大的三七所打的粉有效成分含量稍高。所以決定三七粉的質(zhì)量和價(jià)格的是所用原料三七的等級(jí)，比如20頭，30頭等。三七粉的顏色:正常為灰白色、土黃色、綠白色或是綠中偏、偏白。三七粉味道有人參味；微苦回甘。可觸摸三七粉感受細(xì)度：如面粉細(xì)度；越細(xì)越好、說明吸收率好。純的三七粉很結(jié)實(shí)，假的三七粉很松散。 擴(kuò)展資料三七主產(chǎn)于云南文山、廣西的田陽(yáng)、靖西、百色等地，江西、貴州、湖北、四川等地亦有栽培，現(xiàn)在多為栽培品種。三七粉有良好的止血功效、顯著的造血功能；能加強(qiáng)和改善冠脈微循環(huán)，擴(kuò)張血管；能夠有效鎮(zhèn)痛，抗疲勞、提高學(xué)習(xí)和記憶能力。不同的三七的功效也有明顯的區(qū)別，生三七主要用于跌打瘀血、外傷出血、產(chǎn)后血暈、吐血等血癥，熟三七用于身體虛弱、食欲不振、神經(jīng)衰弱、過度疲勞、失血、貧血等。參考資料來源：百度百科-三七粉
5，薄層色譜鑒別硅膠板跑的都不是很好
第一個(gè)你說的，出現(xiàn)的斑點(diǎn)頁(yè)面整體不平整，傾斜，你要檢查你的薄層板，手拿著板對(duì)光仔細(xì)看，有沒有出現(xiàn)上下、左右薄厚不均、或有明顯的想波浪一樣的條狀。這個(gè)鋪板的時(shí)候要特別注意。還有展開的時(shí)候要注意板是不是沒放好。如果有這些癥狀的話，跑板不平整是正常的。第二個(gè)上端的斑點(diǎn)分不開，但是底下和中間的分開了。首先建議你計(jì)算下這個(gè)上端的斑點(diǎn)的Rf值，測(cè)出它是不是你要的斑點(diǎn)，0.2~0.8之間，你知道的。我做薄層也有遇到一個(gè)上端的斑點(diǎn)比較大的，但是我要的斑點(diǎn)分得很好所以就不理它了。因?yàn)殍b別的是一整個(gè)藥材，所以出現(xiàn)的斑點(diǎn)比較多又復(fù)雜，所以你想完全搞清楚每一個(gè)斑點(diǎn)是什么物質(zhì)那是很麻煩的事咯，
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是人家藥委反復(fù)研究過的，一般來說不會(huì)有什么問題，要說不同的話那就是跑板時(shí)候的溫度、展開劑濕度或者預(yù)平衡、預(yù)飽和得夠不夠適合的問題了，很久以前我不懂的時(shí)候跑出來的板也是怪丑的，做多了就好了，呵呵，不知道有沒有幫到你，有幫助的話要記得采納哦。
特別提醒下你鋪板的時(shí)候啊，最好是顛平了然后立只筆在桌面上，看那只筆在剛鋪好的板上的倒影是不是筆直筆直，筆直了就可以了，然后放在氣流相對(duì)穩(wěn)定的空間的平整的臺(tái)面上，讓它依靠自身流動(dòng)性細(xì)分修平自然晾干，活化，置干燥器內(nèi)保存
6，川芎對(duì)照藥材 薄層有兩個(gè)熒光斑點(diǎn)是怎么回事
痛舒片是在痛舒膠囊的基礎(chǔ)上經(jīng)改變劑型而研制的新藥，包括燈盞細(xì)辛、三七、七葉蓮、梔子、甘草等八味中藥。具有活血化瘀，舒筋活絡(luò)，化痞散結(jié)，消腫止痛的功效。在臨床上用于跌打損傷，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛，肩周炎，痛風(fēng)性關(guān)節(jié)痛，乳腺小葉增生。三七及燈盞細(xì)辛是方中的主藥，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，根據(jù)三七、燈盞細(xì)辛所含化學(xué)成分的不同，采用了薄層色譜法對(duì)其進(jìn)行了定性分析，準(zhǔn)確地將待檢成分檢出。 儀器及材料 硅膠G（青島海洋化工）、人參皂苷Rg1（中國(guó)藥品生物制品檢定所）、三七皂苷R1（中國(guó)藥品生物制品檢定所）、野黃芩苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所）、其他試劑均為分析純。 方法與結(jié)果 2.1三七的鑒別 2.1.1供試品溶液的制備取本品4片，除去包衣，研細(xì)，加水浸潤(rùn)，攪勻，加水飽和的正丁醇20ml，超聲處理30分鐘，取正丁醇液，用正丁醇飽和的水60ml，振搖洗滌，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。 2.1.2對(duì)照品溶液的制備取人參皂苷Rg1、三七皂苷R1對(duì)照品，分別加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 2.1.3陰性對(duì)照溶液的制備取缺三七藥材的藥品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。 2.1.4薄層層析照薄層色譜法（中國(guó)藥典2000年版一部附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿—甲醇—水（7∶3∶0.5）為劑，，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘15分鐘。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；置紫外光燈（365nm）下檢視，顯相同的熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照液色譜無(wú)此斑點(diǎn)。(見圖1） 2.2燈盞細(xì)辛的鑒別 2.2.1供試品溶液的制備取本品12片，除去包衣，研細(xì)，加甲醇30ml超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。 2.2.2對(duì)照品溶液的制備取野黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。 2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備取缺燈盞細(xì)辛藥材的藥品，按供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。 2.2.4照薄層色譜法（中國(guó)藥典2000年版一部附錄VIB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水（5：3：1：1）為劑，，取出，晾干，噴以1％三氯化鐵乙醇溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照液色譜無(wú)此斑點(diǎn)。（見圖2）討論本實(shí)驗(yàn)中三七和燈盞細(xì)辛均采用超聲提取的方法，都獲得了滿意的提取效果。在實(shí)驗(yàn)中要注意的是三七前，劑在層析缸中一定要充分飽和，否則易出現(xiàn)邊緣效應(yīng)。
7，漳州市生物化學(xué)制藥廠跳骨片用什么藥引子服
跳骨片 拼音名:Tiaogu Pian 英文名: 書頁(yè)號(hào):Z17-271 標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3—B—3348—98 【處方】骨碎補(bǔ)(炒)28g 煅自然銅 14g士鱉蟲14g 乳香(炒)14g 沒藥(炒) 14g紅花7g 三七14g 仙桃草 14g血竭14g 黃芪28g 麩炒積殼 28g烏藥7g 冰片3.4g馬錢子(制) 10g細(xì)辛7g 羌活7g獨(dú)活7g狗脊(炒)14g 蒺藜14g 朱砂(水飛)7g 【制法】以上二十昧,除冰片、朱砂外,其余馬錢子等十八味粉碎成細(xì)粉,與朱砂配研,加入 適量輔料,混勻,制成顆粒,干燥；將冰片研細(xì),加入上述顆粒中,混勻,壓制成1000片,包糖衣, 即得, 【性狀】本品為糖衣片,除去糖衣后顯深棕色；氣香,味苦、略麻. 【鑒別】(1)取本品10片,除去糖衣,研細(xì),加甲醇20ml,回流提取30分鐘,濾過,濾液蒸干, 殘?jiān)铀?0ml使溶解,濾過,濾液用醋酸乙酯20ml提取,提取液蒸干,殘?jiān)蛹状?ml使溶解,作為 供試品溶液.另取柚皮甙對(duì)照品,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作為對(duì)照品溶液.照薄層色譜 法(附錄 Ⅵ B)試驗(yàn),吸取上述兩種溶液各4μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以苯—醋酸乙酯— 甲酸—水(1:12:2.5:3)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴以三氯化鋁試液,置紫外光燈 (365nm)下檢視.供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn). (2)取本品10片,除去糖衣,研細(xì),加氯仿20ml、濃氨溶液1ml,回流提取1小時(shí),濾過,濾液 用0.05mol/L硫酸溶液10ml提取2次,合并硫酸提取液,加濃氨溶液使呈堿性,用氯仿10ml提取2次, 合并氯仿液,蒸干,殘?jiān)訜o(wú)水乙醇—氯仿(1:1)混合液1ml使溶解,作為供試品溶液.另取士的寧 對(duì)照品,加氯仿制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液.照薄層色譜法(附錄 Ⅵ B)試驗(yàn),吸取 上述兩種溶液各10μl,分別點(diǎn)于同一含0.4％氫氧化鈉并以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層 板上,以甲苯—丙酮—乙醇—濃氨溶液(8:6:0.5:2)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干,噴 以稀碘化鉍鉀試液.供試品色譜中,在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(diǎn). 【檢查】應(yīng)符合片劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(附錄 Ⅰ D). 【含量測(cè)定】取本品20片,除去糖衣,精密稱定,混合研勻,置具塞錐形瓶中,再精密稱定, 精密加氯仿50ml與濃氨試液2ml,輕輕搖勻,稱重,于室溫放置24小時(shí),再稱重,用氯仿補(bǔ)足減失 的重量,充分振搖,濾過.精密量取濾液25ml,用硫酸溶液(3→100)提取3次,至生物堿提盡,合 并硫酸液,置另一分液漏斗中,加濃氨試液使呈堿性,用氯仿提取3次,合并氯仿液,蒸干,放冷, 殘?jiān)勇确率谷芙?定量移入5ml量瓶中,加氯仿至刻度,搖勻,作為供試晶溶液.另取士的寧對(duì) 照品,加氯仿制成每1ml含0.8mg的溶液,作為對(duì)照品溶液.照薄層色譜法(附錄 Ⅵ B)試驗(yàn),吸取 對(duì)照品溶液2μl、供試品溶液6μl,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,以甲苯—丙酮—乙醇—濃 氨試液(8:6:0.5:2)的上層溶液為展開劑,展開,取出,晾干.照薄層色譜法(附錄 Ⅵ B薄層掃描 法)進(jìn)行掃描,波長(zhǎng)λs＝254nm,λR＝325nm,測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值. 計(jì)算,即得. 本品每片含馬錢予以士的寧(C21H22N2O2)計(jì),應(yīng)為0.08～0.25mg. 【功能與主治】消腫定痛,活血舒筋,促進(jìn)骨痂生長(zhǎng).用于骨折,脫臼,新久傷痛. 【用法與用量】用藥引送服,十至二十歲:一次4片；二十至三十歲:一次5片；三十至四十 歲:一次6片；五十歲以上:一次7片；一日2次. 【注意】(1)服藥后約3小時(shí)左右,骨折部可自覺感到微有跳動(dòng)10～20分鐘,這說明藥的效用. (2)服藥后若感到全身骨節(jié)均有跳動(dòng),這是服藥過量所致；可服綠豆湯或用肉桂粉1g沖服,即 止. (3)服藥后,安臥避免吹風(fēng)；孕婦忌服. 【貯藏】密封.
8，保心包組方特點(diǎn)
26味中藥：蘇合香.川芎.丹參.三七.冰片.菊花..葛根.安息香.檀香.丁香.土木香.當(dāng)歸.郁金.沉香.黃芪.赤芍.香附.白芷.薤白.延胡索.決明子.降香.首烏藤.石菖蒲.乳香.沒藥。這26味中藥組成的中藥外用藥效果挺好
百度百科
保心包 保心包
拼音名：Baoxin Bao
英文名：書頁(yè)號(hào)：X10-7
標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：WS3-015(Z-05)-95(Z)
批準(zhǔn)文號(hào)：（92）衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-18號(hào)
【處方】 蘇合香 川芎 丹參 三七 、 冰片 菊花 葛根 安息香 、 檀香 丁香 青木香 當(dāng)歸 、 郁金 沉香 黃芪 赤芍 、 香附 白芷 薤白 延胡索 、決明子 降香 首烏藤 石菖蒲 乳香 沒藥
【性狀】 本品為棕黃色具有油性的粉末；氣芳香濃郁，有清涼感。
【鑒別】 (1)取本品2g，置乳缽中，加乙醚5～10ml，研磨，濾過，濾液置蒸發(fā)皿中,使乙醚自然揮發(fā)后，覆蓋表面皿，置水浴上加熱，收集升華物，滴加1％香草醛硫酸溶液1～2滴，液滴邊緣漸顯紅色；升華后的殘?jiān)痈咤i酸鉀試液2ml，以玻璃棒攪拌,即產(chǎn)生苯甲醛的香氣。 (2)取本品2g，加乙醚10ml,振搖15分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取蘇合香對(duì)照藥材、川芎對(duì)照藥材各0.2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取丹參酮ⅡA對(duì)照品,加乙醚制成每1ml含1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典1990年版一部附錄57頁(yè))試驗(yàn),吸取上述四種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(9:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置日光和紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙紅色斑點(diǎn)；在與川芎對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)；再噴以5％香草醛硫酸溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與蘇合香對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。 (3)取[鑒別](2)項(xiàng)下乙醚提取后的殘?jiān)右运柡偷恼〈?0ml，密塞，振搖約10分鐘，放置2小時(shí)，吸取上清液，加3倍量以正丁醇飽和的水，搖勻，放置使分層，取上層液蒸干，
殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對(duì)照藥材0.5g,同法制成對(duì)照藥材溶液。再取三七皂甙R1對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典1990年版一部附錄57頁(yè))試驗(yàn),吸取上述三種溶液各5μl,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇－醋酸乙酯－水(4:1:5)的上層溶液為展開劑, 展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，分別在與對(duì)照藥材色譜及對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。 【檢查】 水分 照水分測(cè)定法(中國(guó)藥典1990年版一部附錄30頁(yè)甲苯法)測(cè)定，不得過9.8％。 其他 應(yīng)符合散劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定(中國(guó)藥典1990年版一部附錄10頁(yè))。
【醚浸出物】 取本品約10g，精密稱定，置索氏提取器中，加適量乙醚,置水浴上加熱回流5小時(shí)，置70℃的水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)酶稍锲髦懈稍?4小時(shí)，精密稱定,即得供試品中含有醚浸出物的重量。本品醚浸出物不得少于15.0％。
【含量測(cè)定】 取本品粉末約10g，精密稱定，置索氏提取器中，加石油醚(30～60℃)適量，置水浴上加熱回流6小時(shí)，減壓回收石油醚，殘留物加新配制的乙醇制氫氧化鉀溶液(0.5mol/L)25ml，置水浴中加熱回流1小時(shí)，減壓回收乙醇，殘?jiān)訜崴?0ml,放冷,加水70ml與硫酸鎂溶液(1.5→50)50ml，混勻，靜置10分鐘，濾過，濾渣用水30ml洗滌，合并洗液與濾液，加鹽酸酸化后，用乙醚振搖提取4次，每次40ml。合并乙醚液,用碳酸氫鈉溶液(1→20)依次振搖提取(20、20、10、10、10ml),每次分出的水溶液均用同一乙醚(20ml)洗滌，合并水液，加鹽酸使成酸性，再用氯仿30、20、20、10ml依次振搖提取，每次氯仿提取液均用同一裝有無(wú)水硫酸鈉的小柱濾過，合并濾液,減壓回收氯仿,殘?jiān)弥行砸掖?0ml溶解，加酚紅指示液2～3滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每1ml的氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于14.82mgC9H8O2。 本品含總香脂酸以桂皮酸(C9H8O2)計(jì)算，不得少于1.5％。
【功能與主治】 芳香開竅，活血化瘀，通痹止痛。適用于胸痹心痛屬于氣滯血瘀或痰瘀交阻證型者，并可防治冠心病心絞痛。
【用法與用量】 外用，將藥袋戴于左側(cè)胸壁心前區(qū)，貼緊皮膚。每袋可持續(xù)使用3～4周，若需要可繼續(xù)更換使用。 【規(guī)格】 每袋裝100g
【貯藏】 密封，置陰涼干燥處。
【使用期限】 二年半。
9，什么是HE染色什么是TTC染色
HE染色是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法. TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)，生成紅色的甲月贊，用來表示細(xì)胞的活力。配制多為2％，染色要避光，37度條件下，它是評(píng)價(jià)腦缺血損傷常用的指標(biāo)。 微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等。化學(xué)因素則是根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生地各種化學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對(duì)于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣，堿性物質(zhì)對(duì)酸性染料較易于吸附。如酸性物質(zhì)細(xì)胞核對(duì)于堿性染料就有化學(xué)親和力，易于吸附。但是，要使酸性物質(zhì)染上酸性材料，必須把它們的物理形式加以改變（如改變pH值），才利于吸附作用的發(fā)生。相反，堿性物質(zhì)（如細(xì)胞質(zhì)）通常僅能染上酸性染料，若把它們變?yōu)檫m宜的物理形式，也同樣能與堿性染料發(fā)生吸附作用。 細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，pH值大約在2—5之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶陰電荷；而堿性染料電離時(shí)染料離子帶陽(yáng)電。因此，帶陰電的細(xì)菌常和帶陽(yáng)電的堿性染料進(jìn)行結(jié)合。所以，在細(xì)菌學(xué)上常用堿性染料進(jìn)行染色。 影響染色的其它因素，還有菌體細(xì)胞的構(gòu)造和其外膜的通透性，如細(xì)胞膜的通透性、膜孔的大小和細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整與否，在染色上都起一定作用。此外，培養(yǎng)基的組成、菌令、染色液中的電介質(zhì)含量和pH、溫度、藥物的作用等，也都能影響細(xì)菌的染色。 二、染料的種類和選擇 染料分為天然染料和人工染料兩種。天然染料有胭脂蟲紅、地衣素、石蕊和蘇木素等，它們多從植物體中提取得到，其成分復(fù)雜，有些至今還未搞清楚。目前主要采用人工染料，也稱煤焦油染料，多從煤焦油中提取獲得，是苯的衍生物。多數(shù)染料為帶色的有機(jī)酸或堿類，難溶于水，而易溶于有機(jī)溶劑中。為使它們易溶于水，通常制成鹽類。 染料可按其電離后染料離子所帶電荷的性質(zhì)，分為酸性染料、堿性染料、中性（復(fù)合）染料和單純?nèi)玖纤拇箢悺！ ?、酸性染料 這類染料電離后染料離子帶負(fù)電，如伊紅、剛果紅、藻紅、苯胺黑、苦味酸和酸性復(fù)紅等，可與堿性物質(zhì)結(jié)合成鹽。當(dāng)培養(yǎng)基因糖類分解產(chǎn)酸使pH值下降時(shí)，細(xì)菌所帶的正電荷增加，這時(shí)選擇酸性染料，易被染色。 2、堿性染料 這類染料電離后染料離子帶正電，可與酸性物質(zhì)結(jié)合成鹽。微生物實(shí)驗(yàn)室一般常用的堿性染料有美蘭、甲基紫、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠和蕃紅等，在一般的情況下，細(xì)菌易被堿性染料染色。 3、中性（復(fù)合）染料 酸性染料與堿性染料的結(jié)合物叫做中性（復(fù)合）染料，如瑞脫氏（Wright）染料和基姆薩氏（Gimsa）染料等，后者常用于細(xì)胞核的染色。 4、單純?nèi)玖稀 ∵@類染料的化學(xué)親和力低，不能和被染的物質(zhì)生成鹽，其染色能力視其是否溶于被染物而定，因?yàn)樗鼈兇蠖鄶?shù)都屬于偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如紫丹類（Sudanb）的染料。 <返回頂端> 三、制片和染色的基本程序 微生物的染色方法很多，各種方法應(yīng)用的染料也不盡相同，但是一般染色都要通過制片及一套染色操作程序。 1、制片 在干凈的載玻片上滴上一滴蒸餾水，用接種環(huán)進(jìn)行無(wú)菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成懸液并涂成直徑約1厘米的薄層，為避免因菌數(shù)過多聚成集團(tuán)，不利觀察個(gè)體形態(tài)，可在載玻片之一側(cè)再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環(huán)于此水滴中進(jìn)行稀釋，涂布成薄層，若材料為液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物中洗下制備的菌液，則直接涂布于載玻片上即可。 2、自然干燥 涂片最好在室溫下使其自然干燥，有時(shí)為了使之干得更快些，可將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長(zhǎng)，以防標(biāo)本烤枯而變形。 3、固定 標(biāo)本干燥后即進(jìn)行固定，固定的目的有三個(gè)： 1）殺死微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本被水沖洗掉。 3）改變?nèi)玖蠈?duì)細(xì)胞的通透性，因?yàn)樗赖脑|(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。 固定常常利用高溫，手執(zhí)載玻片的一端（涂有標(biāo)本的遠(yuǎn)端），標(biāo)本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過3—4次，共約2—3秒鐘，并不時(shí)以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷后，進(jìn)行染色。 以上這種固定法在微生物實(shí)驗(yàn)室中雖然應(yīng)用較多普遍，但是應(yīng)當(dāng)指出，在研究微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)時(shí)不適用，應(yīng)采用化學(xué)固定法。化學(xué)固定法最常用的固定劑有：酒精（95%），酒精和醚各半的混合物，丙酮，1—2%的餓酸等。餓酸能很快固定細(xì)胞但不改變其結(jié)構(gòu)，故較常用。應(yīng)用餓酸固定細(xì)胞的技術(shù)如下：在培養(yǎng)皿中放一玻璃，在玻璃上放置玻璃毛細(xì)管，在毛細(xì)管中注入少量的1—2%餓酸溶液，同時(shí)在玻璃上再放置濕標(biāo)本涂片的載玻片，然后把培養(yǎng)皿蓋上，經(jīng)過1—2分鐘后把標(biāo)本從培養(yǎng)皿中取出，并使之干燥。 4、染色 標(biāo)本固定后，滴加染色液。染色的時(shí)間各不相同，視標(biāo)本與染料的性質(zhì)而定，有時(shí)染色時(shí)還要加熱。染料作用標(biāo)本的時(shí)間平均約1—3分鐘，而所有的染色時(shí)間內(nèi)，整個(gè)涂片（或有標(biāo)本的部分）應(yīng)該浸在染料之中。 若作復(fù)合染色，在媒染處理時(shí)，媒染劑與染料形成不溶性化合物，可增加染料和細(xì)菌的親和力。一般固定后媒染，但也可以結(jié)合固定或染色同時(shí)進(jìn)行。 5、脫色 用醇類或酸類處理染色的細(xì)胞，使之脫色。可檢查染料與細(xì)胞結(jié)合的穩(wěn)定程度，鑒別不同種類的細(xì)菌。常用的脫色劑是95%酒精和3%鹽酸溶液。 6、復(fù)染 脫色后再用一種染色劑進(jìn)行染色，與不被脫色部位形成鮮明的對(duì)照，便于觀察。革氏染色在酒精脫色后用番紅，石碳酸復(fù)紅最后進(jìn)行染色，就是復(fù)染。 7、水洗 染色到一定的時(shí)候，用細(xì)小的水流從標(biāo)本的背面把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。 8、干燥 著色標(biāo)本洗凈后，將標(biāo)本晾干，或用吸水紙把多余的水吸去，然后晾干或微熱烘干，用吸水紙時(shí)，切勿使載玻片翻轉(zhuǎn)，以免將菌體擦掉。 9、鏡檢 干燥后的標(biāo)本可用顯微鏡觀察。 綜上所述，染色的基本程序如下： 制片→固定→媒染→染色→脫色→復(fù)染→水洗→干燥→鏡檢。 <返回頂端> 四、染色方法 微生物染色方法一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染料，有協(xié)助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細(xì)胞各部分結(jié)構(gòu)的（如芽胞、鞭毛、細(xì)胞核等）特殊染色法。食品微生物檢驗(yàn)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。 1、單染色法 用一種染色劑對(duì)涂片進(jìn)行染色，簡(jiǎn)便易行，適于進(jìn)行微生物的形態(tài)觀察。在一般情況下，細(xì)菌菌體多帶負(fù)電荷，易于和帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。因此，常用堿性染料進(jìn)行單染色，如美蘭、孔雀綠、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫和中性紅等。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時(shí)，必須降低染液的PH值，使其呈現(xiàn)強(qiáng)酸性（低于細(xì)菌菌體等電點(diǎn)），讓菌體帶正電荷，才易于被酸性染料染色。 單染色一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗和干燥五個(gè)步驟。 染色結(jié)果依染料不同而不同： 石碳酸復(fù)紅染色液：著色快，時(shí)間短，菌體呈紅色。 美蘭染色液：著色慢，時(shí)間長(zhǎng)，效果清晰，菌體呈蘭色。 草酸銨結(jié)晶染色液：染色迅速，著色深，菌體呈紫色。 2、革蘭氏染色法 革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。 細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng)；弧菌，螺旋體和大多數(shù)致病性的無(wú)芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。 革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣。現(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽(yáng)性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。 另外，陽(yáng)性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色，陽(yáng)性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴(yán)格控制。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)；PH很低時(shí)，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對(duì)結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽(yáng)性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。 革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。 3）自來水沖洗。 4）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分。 7）蕃紅梁色液（稀）染10秒鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。 染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。HE染色是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法. TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)，生成紅色的甲月贊，用來表示細(xì)胞的活力。配制多為2％，染色要避光，37度條件下，它是評(píng)價(jià)腦缺血損傷常用的指標(biāo)。 微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等。化學(xué)因素則是根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)和染料的不同性質(zhì)而發(fā)生地各種化學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對(duì)于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣，堿性物質(zhì)對(duì)酸性染料較易于吸附。如酸性物質(zhì)細(xì)胞核對(duì)于堿性染料就有化學(xué)親和力，易于吸附。但是，要使酸性物質(zhì)染上酸性材料，必須把它們的物理形式加以改變（如改變pH值），才利于吸附作用的發(fā)生。相反，堿性物質(zhì)（如細(xì)胞質(zhì)）通常僅能染上酸性染料，若把它們變?yōu)檫m宜的物理形式，也同樣能與堿性染料發(fā)生吸附作用。 細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，pH值大約在2—5之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶陰電荷；而堿性染料電離時(shí)染料離子帶陽(yáng)電。因此，帶陰電的細(xì)菌常和帶陽(yáng)電的堿性染料進(jìn)行結(jié)合。所以，在細(xì)菌學(xué)上常用堿性染料進(jìn)行染色。 影響染色的其它因素，還有菌體細(xì)胞的構(gòu)造和其外膜的通透性，如細(xì)胞膜的通透性、膜孔的大小和細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整與否，在染色上都起一定作用。此外，培養(yǎng)基的組成、菌令、染色液中的電介質(zhì)含量和pH、溫度、藥物的作用等，也都能影響細(xì)菌的染色。 二、染料的種類和選擇 染料分為天然染料和人工染料兩種。天然染料有胭脂蟲紅、地衣素、石蕊和蘇木素等，它們多從植物體中提取得到，其成分復(fù)雜，有些至今還未搞清楚。目前主要采用人工染料，也稱煤焦油染料，多從煤焦油中提取獲得，是苯的衍生物。多數(shù)染料為帶色的有機(jī)酸或堿類，難溶于水，而易溶于有機(jī)溶劑中。為使它們易溶于水，通常制成鹽類。 染料可按其電離后染料離子所帶電荷的性質(zhì)，分為酸性染料、堿性染料、中性（復(fù)合）染料和單純?nèi)玖纤拇箢悺！ ?、酸性染料 這類染料電離后染料離子帶負(fù)電，如伊紅、剛果紅、藻紅、苯胺黑、苦味酸和酸性復(fù)紅等，可與堿性物質(zhì)結(jié)合成鹽。當(dāng)培養(yǎng)基因糖類分解產(chǎn)酸使pH值下降時(shí)，細(xì)菌所帶的正電荷增加，這時(shí)選擇酸性染料，易被染色。 2、堿性染料 這類染料電離后染料離子帶正電，可與酸性物質(zhì)結(jié)合成鹽。微生物實(shí)驗(yàn)室一般常用的堿性染料有美蘭、甲基紫、結(jié)晶紫、堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠和蕃紅等，在一般的情況下，細(xì)菌易被堿性染料染色。 3、中性（復(fù)合）染料 酸性染料與堿性染料的結(jié)合物叫做中性（復(fù)合）染料，如瑞脫氏（Wright）染料和基姆薩氏（Gimsa）染料等，后者常用于細(xì)胞核的染色。 4、單純?nèi)玖稀 ∵@類染料的化學(xué)親和力低，不能和被染的物質(zhì)生成鹽，其染色能力視其是否溶于被染物而定，因?yàn)樗鼈兇蠖鄶?shù)都屬于偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如紫丹類（Sudanb）的染料。 <返回頂端> 三、制片和染色的基本程序 微生物的染色方法很多，各種方法應(yīng)用的染料也不盡相同，但是一般染色都要通過制片及一套染色操作程序。 1、制片 在干凈的載玻片上滴上一滴蒸餾水，用接種環(huán)進(jìn)行無(wú)菌操作，挑取培養(yǎng)物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成懸液并涂成直徑約1厘米的薄層，為避免因菌數(shù)過多聚成集團(tuán)，不利觀察個(gè)體形態(tài)，可在載玻片之一側(cè)再加一滴水，從已涂布的菌液中再取一環(huán)于此水滴中進(jìn)行稀釋，涂布成薄層，若材料為液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物中洗下制備的菌液，則直接涂布于載玻片上即可。 2、自然干燥 涂片最好在室溫下使其自然干燥，有時(shí)為了使之干得更快些，可將標(biāo)本面向上，手持載玻片一端的兩側(cè)，小心地在酒精燈上高處微微加熱，使水分蒸發(fā)，但切勿緊靠火焰或加熱時(shí)間過長(zhǎng)，以防標(biāo)本烤枯而變形。 3、固定 標(biāo)本干燥后即進(jìn)行固定，固定的目的有三個(gè)： 1）殺死微生物，固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標(biāo)本被水沖洗掉。 3）改變?nèi)玖蠈?duì)細(xì)胞的通透性，因?yàn)樗赖脑|(zhì)比活的原生質(zhì)易于染色。 固定常常利用高溫，手執(zhí)載玻片的一端（涂有標(biāo)本的遠(yuǎn)端），標(biāo)本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過3—4次，共約2—3秒鐘，并不時(shí)以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷后，進(jìn)行染色。 以上這種固定法在微生物實(shí)驗(yàn)室中雖然應(yīng)用較多普遍，但是應(yīng)當(dāng)指出，在研究微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)時(shí)不適用，應(yīng)采用化學(xué)固定法。化學(xué)固定法最常用的固定劑有：酒精（95%），酒精和醚各半的混合物，丙酮，1—2%的餓酸等。餓酸能很快固定細(xì)胞但不改變其結(jié)構(gòu)，故較常用。應(yīng)用餓酸固定細(xì)胞的技術(shù)如下：在培養(yǎng)皿中放一玻璃，在玻璃上放置玻璃毛細(xì)管，在毛細(xì)管中注入少量的1—2%餓酸溶液，同時(shí)在玻璃上再放置濕標(biāo)本涂片的載玻片，然后把培養(yǎng)皿蓋上，經(jīng)過1—2分鐘后把標(biāo)本從培養(yǎng)皿中取出，并使之干燥。 4、染色 標(biāo)本固定后，滴加染色液。染色的時(shí)間各不相同，視標(biāo)本與染料的性質(zhì)而定，有時(shí)染色時(shí)還要加熱。染料作用標(biāo)本的時(shí)間平均約1—3分鐘，而所有的染色時(shí)間內(nèi)，整個(gè)涂片（或有標(biāo)本的部分）應(yīng)該浸在染料之中。 若作復(fù)合染色，在媒染處理時(shí)，媒染劑與染料形成不溶性化合物，可增加染料和細(xì)菌的親和力。一般固定后媒染，但也可以結(jié)合固定或染色同時(shí)進(jìn)行。 5、脫色 用醇類或酸類處理染色的細(xì)胞，使之脫色。可檢查染料與細(xì)胞結(jié)合的穩(wěn)定程度，鑒別不同種類的細(xì)菌。常用的脫色劑是95%酒精和3%鹽酸溶液。 6、復(fù)染 脫色后再用一種染色劑進(jìn)行染色，與不被脫色部位形成鮮明的對(duì)照，便于觀察。革氏染色在酒精脫色后用番紅，石碳酸復(fù)紅最后進(jìn)行染色，就是復(fù)染。 7、水洗 染色到一定的時(shí)候，用細(xì)小的水流從標(biāo)本的背面把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。 8、干燥 著色標(biāo)本洗凈后，將標(biāo)本晾干，或用吸水紙把多余的水吸去，然后晾干或微熱烘干，用吸水紙時(shí)，切勿使載玻片翻轉(zhuǎn)，以免將菌體擦掉。 9、鏡檢 干燥后的標(biāo)本可用顯微鏡觀察。 綜上所述，染色的基本程序如下： 制片→固定→媒染→染色→脫色→復(fù)染→水洗→干燥→鏡檢。 <返回頂端> 四、染色方法 微生物染色方法一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染料，有協(xié)助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法。常用的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法，此外還有鑒別細(xì)胞各部分結(jié)構(gòu)的（如芽胞、鞭毛、細(xì)胞核等）特殊染色法。食品微生物檢驗(yàn)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。 1、單染色法 用一種染色劑對(duì)涂片進(jìn)行染色，簡(jiǎn)便易行，適于進(jìn)行微生物的形態(tài)觀察。在一般情況下，細(xì)菌菌體多帶負(fù)電荷，易于和帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色。因此，常用堿性染料進(jìn)行單染色，如美蘭、孔雀綠、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫和中性紅等。若使用酸性染料，多用剛果紅、伊紅、藻紅和酸性品紅等。使用酸性染料時(shí)，必須降低染液的PH值，使其呈現(xiàn)強(qiáng)酸性（低于細(xì)菌菌體等電點(diǎn)），讓菌體帶正電荷，才易于被酸性染料染色。 單染色一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗和干燥五個(gè)步驟。 染色結(jié)果依染料不同而不同： 石碳酸復(fù)紅染色液：著色快，時(shí)間短，菌體呈紅色。 美蘭染色液：著色慢，時(shí)間長(zhǎng)，效果清晰，菌體呈蘭色。 草酸銨結(jié)晶染色液：染色迅速，著色深，菌體呈紫色。 2、革蘭氏染色法 革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。 細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G—）。為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染。陽(yáng)性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色。有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)和球菌，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng)；弧菌，螺旋體和大多數(shù)致病性的無(wú)芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。 革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別，染色反應(yīng)不一樣。現(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽(yáng)性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底，吸附染料差，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù)。 另外，陽(yáng)性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色，陽(yáng)性菌吸附堿性染料很多，因此不易脫去，陰性菌則相反。所以染色時(shí)的條件要嚴(yán)格控制。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色，兩類菌吸附堿性染料都多，都可呈正反應(yīng)；PH很低時(shí)，則可都呈負(fù)反應(yīng)。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對(duì)結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致，陽(yáng)性菌透性小，故不易被脫色，陰性菌透性大，易脫色。所以脫色時(shí)間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制。 革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復(fù)染等四個(gè)步驟，具體操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。 3）自來水沖洗。 4）加碘液覆蓋涂面染1分鐘。 5）水洗，用吸水紙吸去水分。 6）加95%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，30秒后水洗，吸去水分。 7）蕃紅梁色液（稀）染10秒鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。 染色的結(jié)果，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色。
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